Obtención de callos embriogénicos apartir de explantes florales en 2 clones de cacao theobroma cacao l

Abstract

En el laboratorio de biotecnología de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Técnica de Machala, se realizó la investigación relativa a la formación de callos en teobroma cacao a partir de explantes florales probando diferentes tipos de medios de cultivo. Los objetivos planteados fueron Determinar cual de los dos explantes en estudio es el más adecuado para la obtención de callos en cada uno de los clones estudiados. Determinar cuál de los tres medios de cultivo es el más adecuado para la formación del callo.En el estudio se empleó flores de cacao, Autoclave, Cámara de flujo laminar, pH metro, Balanza de precisión, Refrigeradora o Congeladora, Higrotermógrafo, Mechero de bunsen, Pinzas, Hipoclorito de sodio (NaOCl), fuente de carbono (Sacarosa y Glucosa), Probeta, Pipetas graduadas y volumétrica, Embudos, Vasos de precipitación, Balones, Cajas petrix, Frasco de vidrio, Erlenmeyer, Balones aforados, Varilla agitadora, Pisetas, Bisturi, Agua destilada, Papel aluminio. Los tratamientos fueron T1 EET-48+Base de pétalo+Medio de cultivo 1, T2 EET-48+Base de pétalo+Medio de cultivo 2, T3 EET-48+Base de pétalo +Medio de cultivo 3, T4 EET-48+Base de estambres+Medio de cultivo 1, T5 EET-48+Base de estambres+Medio de cultivo 2, T6 EET-48+Base de estambres+Medio de cultivo 3, T7 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 1, T8 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 2, T9 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 3, T10 EET-103+Base de estambres+Medio de cultivo1, T11 EET-103+Base de estambres+Medio de cultivo 2, T12 EET-103+Base de estambres+Medio de cultivo 3.Las variables estudiadas, Porcentaje de contaminación a los 14 días, Tamaño de formación de callo a los 20 días, Estado evolutivo del callo a los 30 días, Porcentaje de formación de callo a los 45 díasSe colectaron los botones florales en estado inmaduro a partir de 6 a 8 de la mañana para evitar su apertura posterior, seguidamente se los coloco en un recipiente con agua fría y se procedió a llevar al laboratorio. Luego se traslado el material a la cámara de flujo laminar, los botones colectados se desinfectaron de la siguiente manera: Se lavaron los botones con agua común, seguidos de la inmersión en hipoclorito de sodio (NaOCl) al 25% (v/v) durante 10 minutos y de tres enjuagues con agua destilada estéril.Los explantes son colocados en cajas petri de 60 x 15 mm conteniendo de 7 a 8 ml de medio de cultivo semisólido PCG (PrimaryCallusGrowth Medium). En cada caja petri se colocaron 5 bases de estambres y 5 bases de pétalos, perteneciente a un mismo botón, distribuidos uniformemente en toda la superficie del medio, asegurando un buen contacto de los explantes con el medio de cultivo. De los análisis de varianza se evidencio que los tratamientos que mejor respuesta tuvierona la formación de callos, fueron T7 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 1, T8 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 2, T9 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 3, variable en la cual se obtuvo significancia estadística. Los explantes florales procedentes del clon eet-103 constituyeron un método idóneo para el desarrollo de la embriogénesis punto de partida para la regeneración de Tehobroma cacao.