Obtención de callos embriogénicos apartir de explantes florales en 2 clones de cacao theobroma cacao l - Valarezo Cueva, Roger Efrain (Machala : Universidad Técnica de Machala, 2015)
En el laboratorio de biotecnología de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Técnica de Machala, se realizó la investigación relativa a la formación de callos en teobroma cacao a partir de explantes florales probando diferentes tipos de medios de cultivo. Los objetivos planteados fueron Determinar cual de los dos explantes en estudio es el más adecuado para la obtención de callos en cada uno de los clones estudiados. Determinar cuál de los tres medios de cultivo es el más adecuado para la formación del callo.En el estudio se empleó flores de cacao, Autoclave, Cámara de flujo laminar, pH metro, Balanza de precisión, Refrigeradora o Congeladora, Higrotermógrafo, Mechero de bunsen, Pinzas, Hipoclorito de sodio (NaOCl), fuente de carbono (Sacarosa y Glucosa), Probeta, Pipetas graduadas y volumétrica, Embudos, Vasos de precipitación, Balones, Cajas petrix, Frasco de vidrio, Erlenmeyer, Balones aforados, Varilla agitadora, Pisetas, Bisturi, Agua destilada, Papel aluminio. Los tratamientos fueron T1 EET-48+Base de pétalo+Medio de cultivo 1, T2 EET-48+Base de pétalo+Medio de cultivo 2, T3 EET-48+Base de pétalo +Medio de cultivo 3, T4 EET-48+Base de estambres+Medio de cultivo 1, T5 EET-48+Base de estambres+Medio de cultivo 2, T6 EET-48+Base de estambres+Medio de cultivo 3, T7 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 1, T8 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 2, T9 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 3, T10 EET-103+Base de estambres+Medio de cultivo1, T11 EET-103+Base de estambres+Medio de cultivo 2, T12 EET-103+Base de estambres+Medio de cultivo 3.Las variables estudiadas, Porcentaje de contaminación a los 14 días, Tamaño de formación de callo a los 20 días, Estado evolutivo del callo a los 30 días, Porcentaje de formación de callo a los 45 díasSe colectaron los botones florales en estado inmaduro a partir de 6 a 8 de la mañana para evitar su apertura posterior, seguidamente se los coloco en un recipiente con agua fría y se procedió a llevar al laboratorio. Luego se traslado el material a la cámara de flujo laminar, los botones colectados se desinfectaron de la siguiente manera: Se lavaron los botones con agua común, seguidos de la inmersión en hipoclorito de sodio (NaOCl) al 25% (v/v) durante 10 minutos y de tres enjuagues con agua destilada estéril.Los explantes son colocados en cajas petri de 60 x 15 mm conteniendo de 7 a 8 ml de medio de cultivo semisólido PCG (PrimaryCallusGrowth Medium). En cada caja petri se colocaron 5 bases de estambres y 5 bases de pétalos, perteneciente a un mismo botón, distribuidos uniformemente en toda la superficie del medio, asegurando un buen contacto de los explantes con el medio de cultivo. De los análisis de varianza se evidencio que los tratamientos que mejor respuesta tuvierona la formación de callos, fueron T7 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 1, T8 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 2, T9 EET-103+Base de pétalo+Medio de cultivo 3, variable en la cual se obtuvo significancia estadística. Los explantes florales procedentes del clon eet-103 constituyeron un método idóneo para el desarrollo de la embriogénesis punto de partida para la regeneración de Tehobroma cacao.
In the biotechnology laboratory of the College of Agricultural Sciences at the Universidad Técnica de Machala, research on callus formation in Theobroma cacao from floral explants trying different types of culture media was performed.The objectives wereTo determine which of the two explants studied is most suitable for obtaining individual callus clones.To determine which of the three culture media is most suitable for callus formation.In the study I used cocoa flowers, autoclave, laminar flow chamber, pH meter, precision balance, a fridge, hygrothermograph, bunsen burner, tongs, sodium hypochlorite (NaOCl), carbon source (sucrose and glucose), graduated test tube and volumetric pipettes, funnels, beakers, balls, boxes petrix, glass bottle, erlenmeyer, stirring rod, scalpel, distilled water. The treatments were T1 EET-48 + Base + petal culture medium 1, T2 EET-48 + Base + petal culture medium 2, T3 EET-48 + Base + Culture medium petal 3, T4 EET-48 + base culture medium stamens + 1 T5 EET-48 + base + culture medium stamens 2 T6 EET-48 + base + culture medium stamens 3 T7 EET-103 + base + petal Middle cultivation 1 , T8 EET-103 + Base + petal culture medium 2, T9 EET-103 + Base + culture medium petal 3, T10 EET-103 + Base + Medium cultivo1 stamens, T11 EET-103 + Base stamens culture medium + 2 T12 EET-103 + Base + culture medium stamens 3.The studied variables were, percentage of contamination at 14 days, Size callus formation at 20 days, evolutionary state of callus after 30 days, percentage of callus formation at 45 days.Flower buds were collected unripe from 6-8 in the morning to avoid rear opening, subsequently place them in a bowl with cold water and proceeded to lead the laboratory. The material is then transferred to the laminar flow chamber, the collected buttons were disinfected in the following manner: The buttons were washed with plain water, followed by immersion in sodium hypochlorite (NaOCl) to 25% (v / v) for 10 minutes and three rinses with sterile distilled water.Explants are placed in petri dishes containing 60 mm x 15 7 to 8 ml of semisolid medium PCG (Primary Callus Growth Medium). Each petri dish contained five stamens bases petals 5 bases belonging to the same button, distributed uniformly throughout the surface of the medium, ensuring good contact with the explant culture medium.From the ANOVAs was evidenced that the treatments with better results were T7 EET-103 + Base petal + culture medium 1 T8 EET-103 + Base petal + Culture medium 2 T9 EET petal -103 + Base + culture medium 3, variable in which statistical significance was obtained. The floral explants from clone EET-103 was a suitable method for the development of embryogenesis, starting point for the regeneration of Theobroma cocoa.
Keywords: CALLO; EXPLANTES FRORALES; CACAO; PÉTALO